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提取SD大鼠原代脂肪间充质干细胞-Z6·尊龙凯时

发布时间:2025-02-08   信息来源:长孙荣全

Z6·尊龙凯时提供了一种高效提取大鼠原代脂肪间充质干细胞的方法,适用于SD大鼠,以下是详细步骤。

提取SD大鼠原代脂肪间充质干细胞-Z6·尊龙凯时

实验材料准备

选择大约2周龄或200克左右的SD大鼠。所需器械包括灭菌镊子、眼科直剪、眼科弯剪及磁珠等。需准备5mL注射器、0.22μm过滤器、泡沫板、图钉用于固定大鼠。使用75%乙醇进行消毒。此外,还需准备预冷的无菌PBS、水、15mL和50mL无菌离心管、细胞筛和无菌培养瓶等。培养基方面,采用SD大鼠脂肪间充质干细胞完全培养基。

实验操作步骤

将所需材料置于超净工作台,并进行紫外线消毒30分钟。然后配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶,并过滤除菌。将大鼠通过脱颈法处死后,浸泡在75%酒精中2-3分钟,然后在超净工作台上将其固定于泡沫板上。小心剪开大鼠腹股沟部位的皮肤,暴露出脂肪组织,仔细剪取脂肪组织并放入PBS中,避免剪到血管。用PBS清洗脂肪组织,剔除多余血管和淋巴结。

剪碎脂肪组织至合适大小(如2mm×2mm),然后加入胶原酶,在37℃下进行消化,每隔5分钟震荡一次或持续搅拌。消化完成后,将细胞悬液转移至离心管中,离心后弃去上层脂滴泡沫和上清液,并用培养基重悬沉淀。接着,将细胞悬液过滤,再次离心后弃去上清液,用培养基重悬并接种到培养瓶中。最后,将培养瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中进行培养。

注意事项

在实验过程中,需保持无菌操作,避免细胞污染。脂肪组织的剪取及清洗过程应格外细致,以避免损伤细胞或引入杂质。消化过程中,应严格控制时间和温度,避免过度消化引发细胞损伤。此外,在离心和过滤过程中也应轻柔操作,以防止细胞损失或破裂。

使用Z6·尊龙凯时的设备与材料,优化您的实验流程,确保获得高质量的干细胞提取效果,助力生命科学研究的进展。