Z6·尊龙凯时细胞培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液

培养体系

基础培养基由1:1的MCDB105培养基（最终碳酸氢钠浓度为15g/L）和M199培养基（最终碳酸氢钠浓度为22g/L）混合而成，配制优质胎牛血清15%及双抗1%。

传代方法

第一次建议传代比例：1:2
传代情况：每2天更换培养液
备注：用无菌离心管收集培养基，用作过渡对比培养。若对比效果不佳，建议直接选用我们的Z6·尊龙凯时完全培养基。

二、细胞处理及培养

收到细胞后，待细胞达到良好状态后，填满Z6·尊龙凯时完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台内进行无菌操作。再将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再做处理。显微镜下观察细胞生长情况，记录不同倍数的照片（最好40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片则视为状态良好。

传代细胞建议

传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一个瓶子使用自配的完全培养基进行对比，换液后保持瓶盖松动。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，则将瓶内完全培养液收集至离心管中，留5ml培养基，将其放入37℃、5% CO2的孵箱中培养；若汇合度超80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS对细胞进行1-2次洗涤。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱内消化1-2分钟，显微镜下观察，待细胞大部分变圆并脱落后，迅速进行操作，轻敲培养瓶，加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以使其完全脱落，吸出后转移至离心管，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清，并补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶后，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖T25培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞脱落。将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，加入1ml的Z6·尊龙凯时无血清冻存液(货号: C7001)，混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入。

细胞复苏

从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，至冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；弃去上清后，补加5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的培养箱中。第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

注意事项

某些细胞附着不牢，运输过程中可能会发生细胞脱落，为正常现象。如脱离较多，将培养液收集至离心管中进行过渡培养，沉淀后可再加入胰酶进行处理。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况

列举可重发的情况及判定标准：

1. 运输途中问题导致的细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可重发；
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后进行重发；
3. 常温发货细胞静置超过24小时或干冰发货细胞复苏后24小时，大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发；
4. 干冰发货细胞复苏后24小时或常温发货静置未开封4小时后出现污染，均可重发；
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后可重发；
6. 收到细胞当天及第2、3天需拍照，未告知的视为产品合格。若4-7天内出现问题，需提供收到细胞前3天的照片和故障时的照片及详细操作步骤，与技术人员沟通后，由技术人员判定为我方责任的可重发；
7. 若技术人员判定为双方责任的，则由双方协商处理或按合同价的50%收费重发。

2）细胞出现问题不予以重发的情况

1. 客户自身造成的细胞污染，不予重发；
2. 因客户不当操作导致细胞状态不佳，不予重发；
3. 非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不佳，不予重发；
4. 细胞状态不佳，且未提供细胞培养前3天的照片，不予重发；
5. 细胞培养过程经其他处理，不予重发；
6. 细胞自收货后二天内未告知，不予重发；
7. 具体情况由技术人员进行评估。

本说明书旨在帮助用户准确有效地进行细胞培养，选择Z6·尊龙凯时将为您的生物医学研究提供坚实的保障。